Minőségi PCR-elemzés a hepatitis C kimutatására

A hepatitis C súlyos vírusos betegség, amely a beteg testében baktériumok, például HCV hatására jelentkezik. A fejlődési stádiumtól függően egy ilyen patológia tünetek nélkül is haladhat, vagy sárgaságként, csökkent aktivitásként és más funkcionális rendellenességként jelentkezhet. Ugyanakkor ez a betegség csak az első hetekben gyógyítható meg, míg kórokozója inkubációs periódusban van. A hepatitis C kvalitatív elemzése a kezdeti szakaszban diagnosztizálhatja a fertőzést.

Általános tények a hepatitis C-ről

A C kategóriájú hepatitist tartják a legveszélyesebbnek a vírusos megbetegedések minden típusa közül, mivel nagyon hajlamos a mutációra. A testbe kerülve az RNS-komponensek folyamatosan változtatják szerkezetüket, ezért az immunrendszer nem képes önállóan előállítani a megfelelő antitesteket a betegség természetes gyógyítására. Ez lehetővé teszi a fertőzés terjedését különösebb akadályok nélkül..

Néhány hét múlva a vírus olyan állapotba mutálódik, hogy az ember kezdi érezni az első tüneteket, amelyek a következők formájában nyilvánulnak meg:

  • Időszakos szédülés;
  • Hányinger vagy akár hányás;
  • Krónikus fáradtság;
  • Fájdalom a jobb hypochondriumban;
  • Megnövekedett testhőmérséklet.


Az exacerbáció stádiumát követően a betegség krónikussá válik. A gyógyszeres terápia segítségével a beteg csak az inkubációs periódus alatt tudja támogatni, elkerülve az ismételt visszaeséseket.

A diagnosztika indikációi

A hepatitis C vírus RNS-sejtjeinek kvalitatív vizsgálatát nem a beteg kérésére hajtják végre, az ilyen eljárás indikációi csak:

  • Biopsziával növesztett szövetek vizsgálata;
  • Leukaemiák és rosszindulatú daganatok kutatása;
  • A szervezet diagnosztikája genetikai patológiák jelenlétére;
  • Egy személy azonosítása a páciens biológiai folyadékainak összehasonlításával a rendelkezésre álló biológiai anyagokkal;
  • Vírusfertőzés (vegyes hepatitisz) kórokozójának kimutatása.

Ezenkívül az RNS-elemzés képes felmutatni a jelenlegi terápia hatékonyságának értékelését, ami nagyon fontos egy vírusos betegség kezelésében..

Mi a PCR elemzés

A polimeráz láncreakció vizsgálata a vér mélyreható elemzése, amelyet a vírus RNS-sejtjeinek kimutatása céljából végeznek benne. Az iránytól függően ez az eljárás megmutatja:

  • A hepatitis jelenléte vagy hiánya a testben (a PCR kvalitatív típusa);
  • Az immunrendszer vírusterhelése (kvantitatív teszt, amely megmutatja a vérben lévő ribonukleinsav szintjét);
  • A betegség aktuális genotípusa (genotipizálás).

A fenti tesztek közül csak az első kötelező. A visszafejtés eredményei alapján az orvos további részleteket tudhat meg a jelenlegi betegségről..

A legfontosabb kutatási előnyök

Ha összehasonlítjuk a PCR-analízist olyan eljárásokkal, mint: UAC, ELISA és ultrahang szkennelés, akkor az első tesztnek számos jellemző előnye lesz:

  • Az eredmények feldolgozásának nagy sebessége;
  • Szinte az emberi biológiai folyadékok (verejték, könnyek, vér, a nyálkahártyától való kaparás, sőt a bőr hámjának tanulmányozása) képessége;
  • A vírusterhelés mutatójának jelenléte;
  • A vizsgálati anyag teljes fertőtlenítése (egy ilyen eljárást a PCR-elemzés megkezdése előtt hajtanak végre a fertőzés megelőzése érdekében a keletkező folyadékon keresztül);
  • Magas információtartalom (ez a reakció nemcsak a vírus jelenlétét mutatja, hanem meghatározza annak természetét is).

Fontos tudni! A hepatitis C PCR-tesztjének egyetlen hátránya a személyzet és az eszközök komplex képzésének szükségessége..

Kiváló minőségű PCR hepatitis C esetén

A hepatitis C magas színvonalú PCR-jének eredménye az egész vizsgálat alapvető mutatója, mivel ennek köszönhetően az orvos meghatározhatja a patológia jelenlétét a betegben. De a fenti reakcióra adott negatív válasz nem mindig jelzi a teljesen egészséges testet. Végül is, ha az RNS-sejtek száma a megengedett szint alá csökken, akkor a PCR-vizsgálat egyszerűen nem veszi észre őket.

Az elemzési eredmények értelmezése

A hepatitis C sejtekből származó RNS jelenlétére vonatkozó kvalitatív PCR-teszt csak két lehetséges választ tud felmutatni. Vegye figyelembe az ember normális állapotát és a folyamatban lévő patológiát jelző értékeket.

Norma

A kvalitatív polimeráz láncreakciós teszt normál mutatója negatív eredményt mutat. Nulla vírusterhelés mellett és azonosított genotípus hiányában figyelhető meg. De biztonságuk teljes körű megbizonyosodása érdekében jobb, ha a beteg számos további eljáráson megy keresztül, amelyek feltárhatják a hepatitis C fertőzéshez vezető betegségeket.

Eltérések

Ha a PCR-teszt pozitív választ mutatott, akkor ez egyértelmű jele annak, hogy vírus van jelen a vizsgált személy testében. A mennyiségi értéktől (1,8x-től 2,4x-ig) függően az orvos meg tudja határozni a fejlődés jelenlegi szakaszát, amely az első lépés lesz a terápia helyes menetének elkészítésében. A genotipizálás segítségével a hepatitis kategóriáját még a jellegzetes megnyilvánulásai előtt is felismerheti (B1, B2 vagy B3 mutató).

Hamis pozitív és hamis negatív eredmények

Önmagában a PCR-teszt szinte soha nem hibás. De az emberi tényező hatására a hamis diagnózis valószínűsége jelentősen megnő. Ezért a lehető legpontosabb dekódolás érdekében a következő szabályokat kell figyelembe venni a polimeráz láncreakció végrehajtása előtt:

  1. Valamennyi vizsgált biológiai anyagnak megfelelő távolságban kell lennie egymástól (bármelyik biokomponens kombinációja mindig hamis pozitív eredményt fog okozni);
  2. Elemzés céljából a kapott folyadékokat speciális, védett tartályokban kell tárolni és szállítani, ahol a hőmérsékleti viszonyok figyelhetők meg (a biológiai komponensek nagyon könnyen elveszítik tulajdonságait, ami szintén hamis diagnózis okává válik);
  3. A biológiai anyagokkal végzett munka előtt a laboratóriumi helyiséget alaposan meg kell kezelni, hogy a törmelék ne kerüljön a vizsgálati folyadékba;
  4. A lejárt reagensek használata szigorúan tilos (az ilyen gondatlanság nem ritka a modern orvosi intézményekben).

Fontos tudni! A kapott PCR-eredmény helyessége magától a pácienstől is függhet, ha nem tartja be a vérmintára való felkészülés szabályait. A felsorolt ​​helyzetek eredménye az elemzés újraküldése lesz..

A PCR-elemzés gyakorisága

A modern orvoslás nem szab korlátozásokat a hepatitis C magas színvonalú PCR-elemzésére. De egy ilyen eljárást a betegek minden kategóriájára bizonyos számú alkalommal végrehajtanak. Ugyanis:

  • Azok számára, akiknek testében nincs patológia - évente legfeljebb 1-2 alkalommal;
  • Hepatitis C kezelés alatt álló betegek számára - kétszer (a kezelés megkezdése előtt, és közelebb a közepéhez);
  • Terhes nők számára - legalább havonta 1-2 alkalommal, a terhesség ideje alatt (akkor a vizsgálatot évente legfeljebb 2 alkalommal végezzük);
  • Néhány hetes csecsemőknek - évente legalább kétszer.

Ártalmatlansága miatt a PCR-módszert gyakran alkalmazzák még újszülötteknél is, ami további jelentős előnynek számít..

Költségét tekintve a polimeráz láncreakció végrehajtásának eljárása jelentősen eltér a standard vizsgálatoktól. Emiatt egyesek nem engedhetik meg maguknak. De más kritériumok szerint ennek a tesztnek nincs versenytársa, ezért az orvosok javasolják a leggyakrabban..

A hepatitis C (hepatitis C RNS) PCR-analízise

PCR elemzés

A kvalitatív elemzés egy vírus jelenlétét jelzi a vérben. Erre a vizsgálatra a hepatitis C elleni antitestekkel rendelkező betegek esetében szükség van. Ennek eredménye "kimutatható" vagy "nem észlelhető". Referenciaértékek (normál értékű értékek) - "nem található". A "kimutatott" eredmény azt jelezheti, hogy a vírus szaporodik és megfertőzi az összes új májsejtet. A kvalitatív PCR-teszt bizonyos érzékenységgel rendelkezik (10–500 NE / ml). Ez azt jelenti, hogy ha a vírus nagyon alacsony koncentrációban van jelen a vérben (a módszer érzékenységi küszöbértéke alatt van), akkor "nem észlelt" eredményt lehet elérni. Ezért, amikor alacsony virémiás (víruskoncentrációjú) betegeknél magas színvonalú PCR-vizsgálatot végeznek, például antivirális terápián vesznek részt, fontos tudni a diagnosztikai rendszer érzékenységét. A vírusellenes válasz szabályozásához antivirális terápia során kívánatos egy legalább 50 NE / ml érzékenységű diagnosztikai rendszert alkalmazni. Ilyen kritériumok teljesülnek, például a COBAS AMPLICOR HCV-TEST (analitikai érzékenység 50 NE / ml vagy 100 példány / ml), a RealBest HCV RNS (analitikai érzékenység 15 NE / ml vagy 38 másolat / ml) elemzők és mások..

Hol biztonságos a hepatitis C elleni új gyógyszerek vásárlása? Véleményünk szerint a legoptimálisabb és legmegbízhatóbb módszer fórumunkon bevált szolgáltatók szolgáltatásainak igénybevétele, akik már több száz betegnek segítettek megszabadulni ettől a betegségtől..

PCR költség

PCR-elemzés, amelynek költsége az alkalmazott reagensektől függ, és 300 rubel lehet. legfeljebb 5000 rubel, egy naptól egy hétig előadva.

A PCR módszer mellett a transzkripciós amplifikáció (TMA) módszerét is alkalmazzák a jobb érzékenységű (kb. 5-10 NE / ml) HCV RNS kimutatására, de ez a módszer Oroszországban még nem elterjedt..

Milyen gyakran kell HCV PCR-t csinálni? Általában közvetlenül a hepatitis C elleni antitestek kimutatása után és az antivirális terápia 4., 12., 24. hete után, valamint az AVT befejezése után 24 héttel, majd SVR esetén évente..

Ábra: 1. Példa a hepatitis C kvalitatív PCR-jének eredményeire.

A kvantitatív PCR (vírusterhelés) elemzés a vírus (virémia) koncentrációjának tesztje a vérben. A vírusterhelés az a genetikai anyag (vírus RNS) egységeinek száma, amely egy adott vérmennyiségben van (általában 1 ml, ami 1 köbcentiméternek felel meg). Ezt az összeget számokban, mértékegységben fejezzük ki NE / ml (nemzetközi egység / milliliter). A vírus mennyisége különböző módon jeleníthető meg. Például 1,5 millió NE / ml, ami 1,500 000 NE / ml-nek vagy 1,5 * 106 NE / ml-nek felel meg. Egyes laboratóriumok más mértékegységeket használnak - másolatok / ml. Az átváltási tényező a másolatokról a nemzetközi egységekre különböző a különböző vizsgálati rendszerek esetében. A hozzávetőleges érték az (IU / ml = 4 példány / ml) képlet alapján újraszámítható, például 5,5 * 105 NE / ml = 2,2 * 106 példány / ml.

Mit befolyásol a vírusterhelés??

Először a fertőzőképesség. Minél magasabb a vírus koncentrációja, annál nagyobb a vírus továbbadásának kockázata, például nemi érintkezés vagy vertikális átvitel útján. Másodszor, a vírus koncentrációja befolyásolja a kezelés hatékonyságát (ha a kezelést interferon alapján végzik). Tehát az alacsony vírusterhelés a terápia során kedvező tényező, a nagyon magas pedig nem kedvező. Emellett a kvantitatív PCR nagy jelentőséggel bír az interferon terápia során annak sikerességének felmérése és a tanfolyam időtartamának megtervezése érdekében. Tehát a kezelésre adott gyors válasz és a terápia előtti alacsony virémia miatt a kezelési idők lerövidülhetnek. Ezzel szemben a vírus koncentrációjának lassú csökkenésével az AVT kiterjeszthető.

Melyik terhelést tekintik alacsonynak és melyiket magasnak?

Nagy terhelésnek 800 * 103 vagy 800 000 NE / ml-t tekintünk, ami körülbelül 300 * 104 vagy 3 000 000 példány / ml. Az 1 * 10 7 NE / ml feletti terhelést nagyon nagynak tekintik. A szakemberek körében azonban még mindig nincs általános vélemény a magas és alacsony virémiát megkülönböztető értékekről. Tehát egyes művekben ezt a határt a 400 000 ME / ml értéknek tekintik..

Milyen gyakran kell kvantitatív tesztet végezni?

Általában a terápia előtt és a 12. kezelési hét után végezzük annak hatékonyságának felmérése érdekében, ha még mindig magas színvonalú RNS-tesztet határozunk meg.

A kvantitatív teszt eredménye lehet a virémia kvantitatív értékelése a fent leírt formátumban, valamint a "mérési tartomány alatti" és "nem észlelt" eredmények.

A kvantitatív PCR érzékenységi küszöbe általában magasabb, mint a kvalitatív PCR-é. Tehát a COBAS AMPLICOR rendszer esetében 600 ME / ml. A „nem észlelt” eredmény azt jelezheti, hogy a kvantitatív teszt és a megerősítő kvalitatív teszt nem mutatta ki a vírusos RNS-t. A „mérési tartomány alatti” eredmény azt jelenti, hogy a kvantitatív teszt nem mutatta ki a hepatitis C RNS-t, de a vírus nagyon alacsony koncentrációban volt jelen (ha további megerősítő kvalitatív tesztet végeztek).

2. ábra Példa a kvantitatív vizsgálati eredményekre.

A hepatitis C kvalitatív PCR-elemzése: az eredmények értelmezése

Az RNS vírus bejut a májsejtekbe, és a betegséget - hepatitis C - okozza. A betegség akut és krónikus. Látható jelek nélküli áramlás jellemzi. Ezt a folyamatot a vírus magas mutációs képessége és a különféle fajok megjelenése magyarázza. Segíti a kórokozó alkalmazkodását a gazdaszervezethez és elkerüli az immunvédelmet..

A fejlődés korai szakaszában végzett kutatás hatástalan. A hepatitisz C kvalitatív PCR-analízisét végzik a kórokozó azonosítása és a kezelés pontos megkezdése érdekében.

Miről fogok megtudni? A cikk tartalma.

Mi a kvalitatív hepatitis C teszt?

A hepatitis C súlyos betegség, cirrhosis és májrák krónikus kialakulásával. A tudósok hosszú ideje nem tudtak vakcinát kifejleszteni a betegség ellen, annak ellenére, hogy tanulmányozták a HCV szerkezeti jellemzőit. A kórokozó fajok változatosságát kevéssé tanulmányozzák.

Csak laboratóriumi vizsgálatok segítségével lehet szervkárosodást kimutatni, mások fertőzését megelőzni. Erre a célra kvalitatív PCR-tesztet végeznek a hepatitis C-re..

A hordozó sok éven át fertőződhet, és nincs tudatában a betegségnek. A kvalitatív elemzés magában foglalja a páciens vérének polimeráz láncreakciójának elvégzését a laboratóriumban az RNS vírus jelenlétére. A diagnosztikát ultraibens érzékeny orvosi berendezéseken végzik, amelyek segítenek annak felismerésében.

Amit a kvalitatív elemzés mutat?

A PCR-t használó magas színvonalú vizsgálatnak előnyei vannak más módszerekkel szemben:

  • Ez a módszer segít a kórokozó genetikai anyagának azonosításában a korai szakaszban;
  • megmutatja a kórokozó típusát;
  • tesztrendszert alkalmaznak, nincs szükség az anyag tápközegbe vetésére;
  • nagy sebességgel diagnosztizálja a kórokozót: az elemzés eredménye 5 órán belül elkészül;
  • rejtett fertőzést tár fel.

Minőségi elemzést írnak elő egy rutinvizsgálat során, amikor a magatartására utaló jelek vannak. A kezelés során, a gyógyulás után hajtják végre. Segítségével megerősítik a hepatitis C vírus antitestjeinek jelenlétét vagy hiányát a vérben.

  • a HCV genotípus mennyiségi tartalma;
  • a vírusos RNS minőségi jellemzői;
  • genotipizálás.

Ismételje meg az eredményt egy érzékenyebb reagenssel.

A kutatás indikációi

A kiváló minőségű PCR elvégzéséhez a kinevezés előfeltételei szükségesek:

  • nemi kapcsolat a hepatitis vírussal fertőzött személlyel;
  • májzsugorodás;
  • műtét előtt kötelező vizsgálat;
  • oltás a hepatitis B vírus ellen;
  • az orvosi intézmények, óvodák, iskolák alkalmazottainak rutinvizsgálata.

Ha a beteg egyértelmű hepatitis jeleit mutatja:

  • a bőr sárgasága, a szemfehérje;
  • fájdalom a jobb hypochondriumban;
  • fáradtság;
  • a máj méretének növekedése;
  • hányinger.

A hepatitis C vírus az ereken keresztül jut be a májsejtekbe. A kórokozó bejuthat hemodialízissel, fertőzött tű használatával, tetoválással, fogorvosi és kozmetikai irodákban.

A vírus átterjedése az újszülöttre egy fertőzött anyától akkor lehetséges, ha a baba bőre sérül a szülés során. A kvalitatív elemzés feltár egy vírust és másodlagos jeleket mutat: antitestek jelenlétét a beteg vérében.

Az eredmények dekódolása

A hepatológus vagy a fertőző betegség szakembere megfejtette a hepatitis C PCR és ELISA eredményeit. A kapott adatokat átfogó vizsgálat igazolja:

  • biokémiai elemzés;
  • Szervi ultrahang;
  • májbiopszia.

A kapott adatok alapján az orvos megerősíti vagy tagadja a hepatitis C-t.

A PCR-teszt szokásos érzékenysége 10-500 NE / ml között mozog. Az elemzés nem ad eredményt, ha az a megadott paraméter alatt van.

A kvantitatív PCR-elemzés megmutatja a vírusterhelést: a kórokozó koncentrációját az emberi testben (hány flavavírustöredék van 1 ml vérben). Ezt a vizsgálati módszert a komplex terápia megkezdése előtt és a betegség 12. hetében írják elő. Segít:

  1. Határozza meg a betegség mértékét. Ha a vírus koncentrációja a páciens vérében magas, akkor a fertőzés továbbadása másoknak is lehetséges..
  2. Írjon fel vírusellenes terápiát, válassza ki a kívánt kezelési módszert.
  3. Tippelje meg a helyreállást.

Fontos meghatározni a genotípust, mivel a kórokozó folyamatosan mutálódik és alkalmazkodik a testhez. 11 típus ismert, hármat azonosítottak az Orosz Föderáció területén: 1, 2, 3. A vizsgálat megmutatja a vírusfertőzés típusát.

A visszafejtéskor ezt írják:

  • Kimutatott RNS;
  • RNS nem volt kimutatható (a betegség nem volt kimutatható);
  • a flavavírus típusa;
  • mennyiségi összetétel (koncentráció a vérben);
  • teszt neve.

RNS detektálva

Ha a beteg biológiai anyagában hepatitis C található, az orvos második vizsgálatot ír elő a hiba kizárására. A biológiai anyag vizsgálatát 1-től 5 napig végezzük. A végrehajtás időtartama a személyzet terhelésétől függ.

A flavavírus és az antitestek jelenléte a betegség elhúzódó lefolyását jelzi, amely krónikus stádiumba került. Hamis jelzések fordulnak elő terhes nőknél és más fertőző betegségben szenvedőknél.

RNS nem észlelhető

A kvalitatív elemzés nem mutatta ki a hepatitis C-t. A negatív érték azt jelenti, hogy nincs vírus RNS a vérben. A fáradtság és egyéb jelek a test egy másik fertőzéséhez kapcsolódhatnak, és további tanulmányokat igényelhetnek..

Mi a teendő, ha hepatitis C vírus RNS-t észlelnek??

Ha a vírus megtalálható a vérben, nem szabad kétségbe esni és pánikba esni. 20 százalékban a betegség önmagában gyógyul. Az antitestek nem mindig jelzik, hogy hepatitis C van. Laboratóriumi hibák vannak. Jóindulatú és rosszindulatú daganatok, fertőző gócok a testben, az előző oltások bekenik a PCR képet.

A korai felismerés segít időben megállítani a betegséget. Vírusellenes terápiát írnak elő. A gyógyszerek 3-6 hónapon belül segítenek egy krónikus betegség gyógyításában.

A hepatitis C kvalitatív PCR-elemzése, az eredmények értelmezése

Hepatitis B és Hepatitis C: vérvizsgálat, a jelzések szerint, az eredmények értelmezése

HBsAg és HCV vérvizsgálat: mi ez, javallatok, dekódolás

Kvantitatív elemzés a hepatitis B esetében: a mutatók és normáik értelmezése

A hepatitis C PCR-elemzése: hol és hogyan kell helyesen átadni, ami pozitív és negatív eredményt jelent

A hepatitis C PCR-je kötelező elemzés a májkárosodás tüneteivel rendelkező betegek vizsgálatakor. A vizsgálatot a diagnózis megerősítésére és a legteljesebb információk megszerzésére írják fel a betegség kórokozójáról, a vírusfertőzés aktivitásáról. Az eredmények szolgálnak alapul az antivirális terápia felírásához, annak időtartamának meghatározásához és hatékonyságának értékeléséhez..

A polimeráz láncreakciót alkalmazó diagnosztika viszonylag nemrégiben terjedt el. A témával kapcsolatos kutatásokat az 1970-es évek közepe óta folytatják. De az első publikációk a PCR gyakorlati orvoslásban való alkalmazásának lehetőségéről csak az 1980-as évek közepén jelentek meg..

  • A PCR típusai
  • A teszt indikációi
  • Hova vigye?
  • Véradás szabályai
  • Az eredmények dekódolása
  • A PCR diagnosztika előnyei
  • A költség

A PCR magyarázatakor az orvosok hangsúlyozzák, hogy ez a legmegbízhatóbb és legmegbízhatóbb elemzés a hepatitis C esetében. Ez a teszt nemcsak a vírus RNS-részecskéinek azonosítását teszi lehetővé, hanem annak koncentrációját (a fertőző folyamat aktivitását jelzi) és a genotípust is. A kapott eredmények kulcsfontosságú szerepet játszanak a további terápia taktikájának és sémájának meghatározásában..

Mi a lényege a reakció megrendezésének? Bizonyos biológiailag aktív anyagok segítségével kis vértérfogatban megnő a vírus RNS-részecskéinek száma. Ezt követően a genom egyes részeit különféle fizikai-kémiai módszerekkel határozzuk meg.

A PCR-t több komponens felhasználásával hajtják végre:

  • Alapozó. Ez egy mesterségesen szintetizált vegyület, amelyben a nukleotidszekvencia teljesen megegyezik a vírus RNS-ének egy meghatározott régiójával, amely nem megy át mutációkon és változásokon a genotípustól függően. A hepatitis C vírus RNS-ét szigorúan specifikus primer alkalmazásával határozzuk meg.
  • RNS-polimeráz. Olyan enzim, amelyet stabilitás és szerkezeti stabilitás jellemez a kémiai reakció helyes lefolyásához szükséges hőmérsékleti változások hátterében. Biztosítja az RNS-lánc felépítését a PCR egyik szakaszában.
  • Fehérje keverék. Az RNS további szakaszainak felépítéséhez "építőanyagra" van szükség, amelyhez a fehérje szerkezetének bizonyos vegyületeit hozzáadják a biológiai mintához.
  • Puffer. Az optimális pH-szintet fenntartó keverék a polimeráz láncreakció áramlásának biztosításához.
  • Biológiai anyagminta, amelyről feltételezhető, hogy HCV (Hepatitis C vírus) RNS mintát tartalmaz.

A PCR stádiumának egyes módszereiben RNS-próbákat és egyéb belső kontrollokat alkalmaznak, amelyeket kontrollmintaként használnak az eredmények azonosításakor.

A vírusos RNS régióinak mátrix segítségével történő növelésének folyamatát amplifikációnak nevezzük. A reakció több szakaszban halad:

  1. Denaturáló. Az RNS-szálak "letekerésének" folyamatát a hőmérséklet bizonyos szintre emelésével biztosítjuk.
  2. Lágyítás. Miután a hőmérsékletet a kívánt értékre csökkentették, az alapozók az RNS-hez kapcsolódnak. Ez a szakasz csak akkor lehetséges, ha a kívánt vírusrészecskék vannak a vérmintában..
  3. Vírusos RNS régiók közvetlen szintézise enzimek részvételével.

A felsorolt ​​PCR stádiumozási ciklusokat több tucatszor ismételjük meg, ami a hepatitis C kórokozó RNS régióinak számának többszörös növekedését biztosítja a laboratóriumi módszerekkel meghatározott szintig.

A vérmintát a vizsgálat előtt megfelelően előkészítik. A benne lévő RNS-t egy hordozó pufferbe adszorbeálják, majd lemossák és felhasználják a polimeráz láncreakció megindításához.

Az eredmények detektálását elektroforézissel (vízszintes vagy függőleges) vagy hibridizációval végezzük. A reakció eredményeinek dekódolására szolgáló módszert a vizsgálat célkitűzései alapján választjuk meg (egyszerűen azonosítjuk az RNS-t, vagy meghatározzuk annak hozzávetőleges mennyiségét)..

PCR - a hepatitis C legpontosabb vérvizsgálata

A HCV-vel kapcsolatos javasolt vizsgálatok listája számos elemet tartalmaz, amelyek különböznek a költségektől, a készültségi időtől és a megvalósítás módjától..

Ha az Egészségügyi Világszervezet (WHO) protokolljaira hivatkozunk, akkor a fertőzés diagnosztizálásának eljárása több egymást követő szakaszból áll..

Először is bérelnek:

  • a vér és a vizelet általános elemzése;
  • vér biokémia;
  • kutatás a glükóz tartalomról (szigorúan éhgyomorra);
  • HIV-teszt;
  • fluorográfia;
  • immunogram (ha autoimmun patológiák jelenlétére gyanakszik).

Ha a biokémiai vérvizsgálat paraméterei eltérnek a fiziológiai normától, a páciensnek vizsgálatot írnak elő, amely a vírus vérrel való érintkezésekor termelődő specifikus antitestek kimutatásán alapul (ELISA).

De a hepatitis C ilyen vérvizsgálata jelentős hátránnyal jár. Az antitestszintézis folyamata az immunkompetens sejtek működésétől és termelésétől függ. A test egyéni tulajdonságai hamis negatív és hamis pozitív válaszokat egyaránt okozhatnak..

Mielőtt ELISA tesztet írna fel, az orvos elmondja a betegnek egy esetleges hibát, amely felvet egy válaszkérdést: "Milyen vérvizsgálat mutatja a hepatitis C-t minimális kockázattal a helytelen eredmények elérésében?" A diagnózis megerősítésére vagy cáfolására a legpontosabb laboratóriumi vizsgálat a valós idejű PCR.

A további cselekvési taktikák attól függnek, hogy a kutatás mit mutat. Ha a diagnózis beigazolódik, a beteget azonnal hepatoprotektorokra írják fel, figyelmeztetik a megfelelő táplálkozás és az egészséges életmód fontosságára. De a célzott terápia lehetetlen a vírusterhelés és a hepatitis C genotípus meghatározása nélkül..

Egyes gyógyszerek provokálhatják a hepatitis B súlyosbodását. Ezért a szövődmények kizárása érdekében a HBsAg-teszteket is előírják. A HCV-t csak negatív vizsgálati eredmény után kezelik.

Fajok: Minőségi, mennyiségi és genotipizálás

A hepatitis C kezdeti diagnózisában a termelt ellenanyagok titerét a szerológiai módszerrel határozzák meg. Ez az eredmény nagyjából mutatja a kóros folyamat aktivitását. De az orvos csak a PCR-adatok tanulmányozása után kaphatja meg a legpontosabb információkat.

Jelenleg szinte az összes laboratóriumban ultraiérzékeny módszerrel végzik az elemzést. Így a HCV diagnózisa a fertőzés után 10-14 napon belül, ritkábban - 2,5-3 hét után lehetséges. A vizsgálat során követett céloktól függően az orvos meghatározott típusú vizsgálatot ír elő.

A következő típusú PCR létezik:

  1. Minőségi. A diagnosztikai vizsgálatok előírása során a betegeknek felmerül a kérdés, hogy mit mutat ez a kutatási módszer. A PCR módszerrel végzett kvalitatív elemzés egy nagyon érzékeny teszt, amely minimális koncentrációban meghatározza a vírus RNS jelenlétét a vérben. Jellemzően ezt a fajta polimeráz láncreakciót reverz transzkripciós technológiával hajtják végre. Ez azon kevés PCR-módszer egyike, amelyben az RNS célként használható.
  2. Mennyiségi. A hepatitis C mennyiségi meghatározása lehetővé teszi a vérben a HCV RNS pontos szintjének meghatározását. A kutatás csak egyetlen módon lehetséges - a valós idejű módszerrel. Az anyag PCR-re történő előkészítése során festéket adnak a mintához. Minden amplifikációs ciklus után automatizált, valós idejű kvantitatív vizsgálatot végeznek. A technikát gyakran fordított transzkripcióval kombinálva hajtják végre. Így lehetséges minőségileg meghatározni a vírus RNS-kópiáinak kis számát. A HCV RNS szintjének kvantitatív meghatározásához akkor van értelme, ha a kvalitatív PCR pozitív eredményt kap..
  3. Genotipizálás. Az elemzést a diagnosztikai folyamat utolsó szakaszában végzik. A vizsgálat elve a nukleotidszekvencia különbségén alapul, amely megkülönbözteti a hepatitis C vírus egyik genotípusát a másiktól. Az elemzést általában multi-primer (multiplex) PCR-rel végezzük.

Ha vírus hordozójának gyanúja merül fel, akkor kiváló minőségű PCR-t kell végrehajtani. Ha az eredmény negatív, akkor a személy valószínűleg egészséges. De a fertőzés teljes kizárása érdekében ajánlott 7-10 nap múlva megismételni a vizsgálatot. Ha a vírus RNS-ét kimutatják, további vizsgálatokat végeznek (kvantitatív és genotipizáló).

A laboratóriumi vizsgálat indikációi

A polimeráz láncreakciós módszerrel történő véradás fő indikációja a hepatitis C esetén egy pozitív enzim immunvizsgálat (típustól függetlenül: Összesen, differenciált IgG és IgM teszt).

Ezenkívül ellenőriznie kell:

  • terhesség alatt (a tesztet kétszer végezzük - az első trimeszterben és a születés előtt 7-10 héttel);
  • fokozott fertőzésveszély esetén (ápolónők, laboránsok, donorközpontok alkalmazottai, kozmetikusok stb.);
  • heves szexuális közösüléssel és ismeretlen személlyel való védtelen érintkezéssel;
  • a HIV, a rák, bizonyos gyógyszerek szedése stb. hátterében;
  • intravénás gyógyszerektől függő betegek;
  • invazív diagnosztikai vagy terápiás eljárások állandó lebonyolításával;
  • 1992 előtt végzett vérátömlesztéssel (korábban nem voltak megbízható módszerek a donor biológiai anyagának vírus jelenlétének ellenőrzésére).
  • amikor egy nyitott seb más vérével érintkezik, sterilizálatlan orvosi műszerekkel.

Az incidencia minden évben növekszik. Ezért a fertőzés korai felismerése érdekében ajánlott a HCV laboratóriumi vizsgálatait évente egyszer elvégezni..

Hol lehet tesztelni

A klinikával való kapcsolatfelvételkor a beteg ingyenes vizsgálatokra jogosult. De először ELISA tesztet tesznek. És csak pozitív vagy kétes eredménnyel mutatják be a PCR-vizsgálatot. Ezért sürgős diagnózist lehet felállítani egy fizetős laboratórium felvételével, ahol a beteg számára megfelelő időben adhat vért a PCR-hez. Ugyanakkor ajánlott azonnal ellenőrizni a májenzimek mutatóit, a szokásos klinikai vérparamétereket.

Általános szabály, hogy a vér PCR-vizsgálata szinte minden laboratóriumban elérhető. Ha a vérgyűjtő pont nincs felszerelve megfelelő felszereléssel, akkor a biológiai anyagot a hőmérsékleti viszonyoknak és egyéb feltételeknek megfelelően kutatás céljából szállítják. A klinikai PCR csak más vizsgálatok után lehetséges, amelyek eredményei közvetetten a hepatitis C jelenlétét jelzik.

Hogyan adjunk helyesen vért

Mielőtt vért adna egy lehetséges vírus kimutatására, számos szabályt be kell tartania az elemzés előkészítéséhez..

A fő szempontokat az emlékeztető jelzi:

  1. 5-7 napig hagyja abba a zsíros, sült ételek, az alkohol fogyasztását. Általában az orvosok javasolják az 5. számú diéta táplálkozási szabályainak betartását.
  2. Ne együnk 12-14 órával a vizsgálat előtt. Csak vizet inni lehet.
  3. Jobb reggel adni a vért..
  4. Az eljárás előtt ne dohányozzon.

Figyelmeztetnie kell az orvost a bevett gyógyszerekre, az esetleges egészségügyi problémákra, a krónikus betegségekre is..

A vért egy vénából veszik. Az eljárás befejezése után az ápoló steril vakolattal lezárja a szúrás helyét, figyelmeztet a kar meghajlításának szükségességére és 10-15 percig ebben a helyzetben tartására. Ellenkező esetben a fájdalmas hematoma valószínűsége magas..

Mennyi ideig tart a kutatás?

Az, hogy mennyi elemzést végeznek, a laboratóriumtól függ. Az átlagos átfutási idő 1-3 nap. Egyes klinikák fizetős szolgáltatást nyújtanak a gyors PCR-teszteléshez, azonban az időt korlátozzák az orvosi berendezések képességei..

A klinikán az eredményeket 7-10 napon belül el lehet juttatni az orvoshoz. Ez a betegek nagy beáramlásával jár. Ugyanakkor a biológiai anyagot minden követelménynek megfelelően tárolják.

Az eredmények dekódolása

Általános szabály, hogy a kiváló minőségű PCR dekódolása nem nehéz. De a félreértelmezés elkerülése érdekében a laboratóriumtól kapott űrlappal orvoshoz kell fordulnia. Az opciókat, amelyek ezt vagy azt a típusú PCR-t jelentik, a táblázat mutatja.

Negatív: az illető egészséges, vagy a vírus RNS koncentrációja a vérben túl alacsony a kimutatáshoz.

Pozitívum: az illető fertőzött

Akkor végezzük, ha kvalitatív kutatási módszerrel detektáljuk a vírus RNS-t.

A kapott vizsgálati eredményektől függően meghatározzák a vírusterhelés szintjét

Hepatitis C esetén végzett, más kutatási módszerekkel megerősítve.

Az elemzés lehetővé teszi a patológia kórokozójának pontos genotípusának megállapítását

De gyakran olyan helyzet áll elő, amikor a hepatitis C ELISA-értéke pozitív, a PCR pedig negatív. Csak az orvos tudja megfejteni az ilyen vizsgálati eredményeket..

Ilyen adatok azonban a következő esetekben lehetségesek:

  • terhesség;
  • akut formában átvitt hepatitis C;
  • HCV-kezelés befejeződött;
  • olyan fertőzések jelenléte, amelyek növelik a hamis pozitív ELISA eredmény valószínűségét.

Csak a polimeráz láncreakció mutatja a vírusfertőzés pontos jelenlétét a szervezetben. A negatív PCR hátterében a pozitív ELISA a legtöbb esetben azt jelzi, hogy az illető nem fertőzött. De az orvosnak meg kell határoznia a hamis pozitív eredmény pontos okát..

Minőségi elemzés

A hepatitis C kvalitatív PCR-elemzése megerősíti a kórokozó jelenlétét a vérben. Ha a vírus RNS-ét nem észlelik, az illető egészséges. De ha fertőzés gyanúja merül fel, ajánlott újra elvégezni a vizsgálatot. A pozitív eredmény fertőzésre utal. De ez az elemzés nem teszi lehetővé a krónikus hepatitis C és az akut megkülönböztetését, és nem tudja megmutatni, hogy a kóros folyamat mennyire aktív..

Mennyiségi teszt

A PCR-rel végzett kvantitatív elemzést a diagnózis megerősítését követően végezzük, és annak dekódolása fontos a kezelési taktika meghatározásához. A hepatitis C kórokozójának részecskék koncentrációjától függően a vírusterhelés több fokát különböztetjük meg: közepes, magas és alacsony. Minél magasabb az indikátor, annál súlyosabb a fertőzés, és annál nehezebb a terápia. Normális esetben a vírusos RNS nincs a vérben.

Genotipizálás

Számos laboratórium kvantitatív PCR-rel együtt végzi a genotipizálást, ami pénzt takarít meg. Ilyen vizsgálatot csak egyszer végeznek, a kezelés megkezdése előtt. Általában az elemzést a négy leggyakoribb genotípus (1, 2, 3 vagy 4) egyikére végzik. A HCV altípust egyidejűleg határozzuk meg. A hepatitis C 5. és 6. alfajának genotipizálása nem minden laboratóriumban lehetséges.

A PCR diagnosztika előnyei

A PCR módszerrel végzett diagnosztika széles körben elterjedt:

  • nagy pontosság (feltéve, hogy a legújabb generációs tesztrendszereket használják);
  • a biomédia mintavételének egyszerűsége;
  • gyors eredmények (maximum 5 nap).

De a fő előny a vizsgálat széles diagnosztikai képességeiben rejlik. Az elemzés nemcsak a vírus azonosítását teszi lehetővé, hanem a szervezetben lévő koncentrációjának pontos meghatározását és a fertőzés genotípusának megállapítását is. Ezenkívül kvantitatív kutatásokra van szükség az antivirális terápia hatékonyságának felméréséhez. A kezelés fő célja a teszt arányának (azaz a HCV RNS kimutathatatlan szintjének) elérése az antivirális kezelés 4, 12 vagy 24 hetében, és ennek az eredménynek a fenntartása.

A költség

A PCR-elemzés költsége régiónként változó. Tehát Moszkvában az árak magasabbak. A kiváló minőségű PCR 600-800 rubelbe fog kerülni, mennyiségi - 2200-3000 rubel, genotipizálás - 1000 rubelből. Pontosan megtudhatja, hogy egy adott tanulmány mennyibe kerül közvetlenül a laboratóriumban, egy orvosi szervezet honlapján vagy telefonon.

A hepatitis C kvalitatív PCR-elemzése: jellemzők, az eredmények értelmezése

A vírusos hepatitis C az egyik legsúlyosabb betegség, amellyel a modern ember szembesülhet. A probléma az, hogy ez a súlyos betegség gyakorlatilag tünetmentes, és az ember normálisnak érezheti magát, míg az alattomos betegség helyrehozhatatlan kárt okoz a májában..

A veszélyes következmények elkerülése érdekében időben meg kell diagnosztizálni a HCV-t. Az egyik legjobb diagnosztikai módszer a hepatitis C kvalitatív PCR-elemzése. A diagnózis azonosításának módszere a betegek számára a leginformatívabb és teljesen fájdalommentes. De hogyan lehet megvizsgálni a hepatitis C PCR-t? Mi ez az elemzés? Hogyan diagnosztizálják a hepatitis C-t PCR-rel? Beszéljünk erről a cikkben.

A hepatitis C elemzése kvalitatív - mi ez?

Jelenleg számos módszer létezik a vírusos betegségek diagnosztizálására, beleértve a HCV-t is. De a hepatitis C PCR vérvizsgálata - mi ez? Először is el kell mondani, hogy ez a páciens biológiai anyagainak vizsgálata a HCV kórokozó kimutatására. A hepatitis C PCR vérvizsgálatát laboratóriumi körülmények között végzik. Erre a vizsgálatra minden olyan beteg számára szükség van, akinek vérében hepatovírus-antigének elleni antitesteket találtak. A hepatitis PCR-diagnosztikájának fő célja a flavavírus kimutatása.

A PCR rövidítés jelentése "polimeráz láncreakció". Ez azt jelenti, hogy a hepatitis C ezen kvalitatív elemzésének segítségével kiderül a májsejtek és szövetek hepatovírus általi károsodásának maximális területe. Ez az analitikai módszer lehetővé teszi a test károsodásának kvantitatív mértékének, valamint a kórokozó minőségi jellemzőinek meghatározását..

A kvalitatív PCR hepatitis teszt eredményei segíthetnek a hepatológusok kezelésében meghatározni a HCV kezelési rendjét egy adott beteg számára. Ezen módszernek köszönhetően meghatározzák a terápiás tanfolyam időtartamát is, mivel annak segítségével meghatározható, hogy a fertőzést milyen erősen kell legyőzni..

Hogyan lehet tesztelni a hepatitis C PCR-t?

A HCV diagnosztizálásakor nagyszámú különféle vizsgálatot végeznek a kérdéses betegség kezelésének legmegfelelőbb módszerének azonosítása érdekében. De hogyan kell elvégezni a hepatitis C PCR-tesztjét?

A kérdés megválaszolása előtt tisztázni kell, hogy a szóban forgó elemzés típusát RNS-tesztnek is nevezik. Valóban, a flavavírus tartalmaz egy RNS-részecskét, amelynek méretei 30-60 nm között vannak. A vírus hajlamos a mutációkra, és ezt mindig figyelembe veszik a típus diagnosztizálásakor. A HCV kórokozó egyes genotípusainak rezisztenciája jelentősen eltér, ezért a betegség lefolyásának prognózisa nagymértékben függ ettől az elemzéstől a kvalitatív hepatitis szempontjából..

De hogyan lehet vért adni a hepatitis C PCR-jéhez? A diagnózis felállításakor mind a páciens előkészítő tevékenységei, mind maga a véradási eljárás nagy jelentőséggel bír:

  • A nap folyamán, mielőtt vért adna a hepatitis magas színvonalú PCR-jére, a betegnek fel kell adnia a zsíros ételeket, az alkoholt és a dohányzást. Ellenkező esetben az eredmények pontatlanok lesznek;
  • Este, a hepatitis PCR-rel történő vérvizsgálatának előestéjén a betegnek nem szabad ennie semmit;
  • A biológiai anyagokat kora reggel, 8:00 óra előtt kell átadni. Ez előtt szigorúan tilos enni és inni;
  • A páciens vérmintáját eldobható steril fecskendővel veszik le a vénából. A személyes biztonság részeként azt javasoljuk, hogy a beteg gondoskodjon arról, hogy az eljárást kizárólag steril fecskendővel végezzék..

A hepatitis C PCR elemzésének átadása után a beteg hazamegy. Egy kis vért vesznek laboratóriumi vizsgálatokhoz, így jelentéktelen vesztesége nem jár negatív hatásokkal..

A kutatási eredmények dekódolása

A hepatitis C PCR diagnosztikájának dekódolását a laboratóriumban végzik. A laboratóriumi dolgozók számos speciális tanulmányt végeznek, amelyek eredményét írásban rögzítik. A teszt standardizált érzékenysége, amelynek köszönhetően meg lehet állapítani egy kórokozó jelenlétét és eloszlását, 10 és 500 NE / ml között mozog.

A teszt eredményeit hasonló módon dekódolják:

  • A pozitív eredmény a kórokozó magas koncentrációját jelzi a gazda vérében. Ebben az esetben minél magasabb a mutató, annál súlyosabb beteg a HCV-ben szenvedő beteg;
  • A negatív vizsgálati eredmények rendkívül alacsony hepatovírus-koncentrációt jeleznek az ember vérében. Ha a hepatitis C PCR-t nem detektálják, a későbbi terápiához meg kell határozni a beteg biológiai anyagának érzékenységének maximális küszöbét a különböző reagensekre..

A biomaterial tanulmányozása után az orvosi laboratóriumi dolgozók konkrét ítéletet hoznak, amelyet kötelezően dokumentálnak és archiválnak.

Mit kell tennie a betegnek, miután megkapta a teszt eredményeit??

A vérminták vizsgálatának eredményeinek kézhezvétele után a betegnek a kezelőorvoshoz kell fordulnia. Kategorikusan nem ajánlott önálló következtetéseket levonni a diagnózisról és megtervezni egy adott kezelést.

A teszt eredményeitől függően a hepatológus az egyik vagy másik terápiás rendet írja elő aktív vírusellenes gyógyszerek alkalmazásával. Az analitikusan meghatározott HCV genotípustól függően a következő kezelési rendek írhatók elő ennek a veszélyes betegségnek:

  • Sofosbuvir a Ledipasvirrel kombinálva az 1., 4., 5. és 6. genotípusban;
  • Sofosbuvir és Daklatasvir - az 1., 2., 3. és 4. pontnál;
  • Sofosbuvir Velpatasvir-rel kombinálva - bármelyik ismert kórokozó genotípusra.

A test általános állapotától, a hepatovírus koncentrációjától és az elváltozás jellemzőitől függően a terápia 12 vagy 24 hétig írható fel, Ribavirinnel vagy anélkül. A betegnek a teljes terápiás időszakra meg kell vásárolnia a gyógyszereket, mivel azokat semmiképpen sem lehet megszakítani..

Azonban egyáltalán nem szükséges pénzt megtakarítani a drága amerikai gyógyszerekre - olcsóbb indiai analógokat vásárolhat. Ezeket a gyógyszereket hivatalos recept szerint gyártják. Az alacsonyabb költség a gyógyszer tömegtermelésének lehetőségével jár. Ugyanakkor az indiai gyártók annyira magabiztosak termékeik magas minőségében, hogy minden garanciát biztosítanak vásárlóiknak. Például Zydus Heptiza felajánlja a helyreállítási garanciát. Ez egy olyan dokumentum, amely szerint a páciensnek joga van a vállalat költségén újbóli kezelésre, ha az előző terápia nem segített.

Fontos! A gyógyszer megvásárlása után a betegnek teljes mértékben be kell tartania a kezelőorvos ajánlásait, és a gyógyszert a teljes terápiás időszak alatt naponta kell használni..

Hol kaphatok kvalitatív elemzést a PCR-re?

Tehát, a válasz a kérdésre: "Hogyan lehet PCR-elemzést végezni a hepatitis C esetében?" Az is ismert, hogy a megfelelő vizsgálat után mit kell tennie a beteg számára. De van még egy dilemma - ahol pontosan lehet vért adni a magas színvonalú hepatitis C PCR-elemzéséhez.

Nagyjából hazánkban átmehet ilyen típusú diagnosztikára:

  • Állami poliklinikákon;
  • Exkluzív szolgáltatási színvonalú magánklinikákon;
  • Kórházakban és fekvőbeteg-klinikákon;
  • Független orvosi laboratóriumokban.

Emellett a hepatitis C PCR-vérvizsgálata külföldi klinikákon és laboratóriumokban is elvégezhető. Ez a kutatási módszer a szabványhoz tartozik.

Mit kell még tudni a hepatitis C magas színvonalú vérvizsgálatáról??

Ha szükség van a hepatitis C PCR-diagnosztikájára, ismernie kell a tesztelés ezen formájának néhány jellemzőjét. Különösen:

  • A szóban forgó vérvizsgálat eredményei már a fertőzés után 4-5 nappal pozitívak lehetnek a HCV szempontjából. Fehérje-vegyületek később képződnek;
  • A hepatitis C kvalitatív vérvizsgálatának eredményeinek dekódolásakor betű állhat a kórokozó genotípus mellett. Például: "1a". Ez egy altípus megnevezés, amely semmilyen módon nem befolyásolja a terápia jellemzőit;
  • A teszt eredményei nagyon gyorsan rendelkezésre állnak. A diagnózis másnapján a beteg megkapja a megfelelő dokumentumot;
  • Ezzel a vizsgálattal egyidejűleg vért veszünk az ELISA vizsgálatra.

A hepatitis C kvalitatív vizsgálatával kapcsolatban véleményt vallanak arról, hogy a beteg vérének ez a vizsgálata nem a legjobb módszer a HCV-típus szintjének meghatározására. Ez a vélemény csak részben igaz, mert a diagnózisnak átfogónak kell lennie..

Minőségi elemzés a hepatitis C esetében: dekódolás

A vírusos hepatitis C kialakulásának oka a Flaviviridae családba tartozó kórokozóval való fertőzés. Hosszú időintervallum észlelhető a fertőzés és az antitesttermelés megkezdése között, ami nem teszi lehetővé a betegség időben történő diagnosztizálását enzim immunvizsgálattal.

A fertőzés gyanúja esetén a hepatitis C PCR-analízisét, biokémiát, CBC-t, májteszteket végeznek. A polimeráz láncreakcióval még a fertőzés első hetében is kimutatható a vírus a vérben, ami a módszer domináns előnye.

A hepatitis C kvantitatív és kvalitatív elemzése és a vizsgálat jellemzői, az előkészítés módja, hibák, dekódolás - részletesen megvizsgáljuk.

Mi a polimeráz láncreakciós módszer?

A polimeráz láncreakció egy molekuláris kutatási technika egy vírusos anyag genetikai anyagának meghatározására a fertőzés első napjaitól kezdve. Az elemzést nagyfokú megbízhatóság, specifikusság és pontosság jellemzi. Neki köszönhetően nemcsak a vírus hiányát / jelenlétét észlelik, hanem a vírusterhelést (mennyiségi érték), a genotípust is.

A vizsgálathoz a beteg vérére van szükség, amelyben feltehetően egy vírusfertőzés RNS-e található. Laboratóriumi körülmények között primereket adnak a biológiai folyadékhoz - ezek a kívánt gén rövid hosszúságú mesterségesen szintetizált fragmentumai. Plusz RNS-polimeráz - egy speciális enzim, amely megsokszorozza a kívánt anyag koncentrációját.

Ezenkívül a vért alkatrészek hozzáadásával egy speciális eszközben többször felmelegítik és lehűtik. Ezután következik a kapott eredmények elemzése, összehasonlítás a vírus ágens ismert génjeivel. Ez alapján következtetést vonnak le a betegségről.

A PCR kutatás fajtái

A hepatitis C PCR elemzését a laboratóriumban végezzük a szükséges reagensek hozzáadásával, három fajtája megkülönböztető jellemzőkkel rendelkezik:

  1. A hepatitis C kvalitatív PCR-elemzése a vizsgálat első szakasza. Rajta keresztül a kórokozó genetikai anyagát kimutatják a vérszérumban.
  2. A kvantitatív vizsgálat lehetővé teszi a vírusterhelés megbecsülését - ez a vírusanyag tartalma a beteg 1 ml vérében. A kezelés megkezdése előtt, majd 1-4-12 hetes terápia után végezzük. Ha a kúra hosszú, a hatékonyság felmérése érdekében a vizsgálatot 24 hetes terápia után kell elvégezni.
  3. Genotipizálás. A fertőző betegség gyorsan fejlődik, a vírus hajlamos a mutációra. Ezért szükséges azonosítani a vírus genotípusát.

A tudósok a vírus 7 genotípusát azonosították. Az Orosz Föderációban 1-2-3 faj nagyon gyakori.

Mindegyik genotípust a kezeléssel szembeni rezisztencia jellemzi.

Például az 1. típusnál a terápia hatékonysága körülbelül 60%, 2-3 típus hátterében a mutató eléri a 85% -ot.

A megfelelő gyógyszerek, a kezelés időtartamának megtalálásához meg kell határozni nemcsak a fertőzés tényét, hanem a vírus koncentrációját, genotípusát is.

Javallatok

A hepatitis, a PCR és az ELISA markerei, más vizsgálatok bizonyos orvosi indikációkkal rendelkeznek:

  • Amikor a beteg kórtörténetében HIV-fertőzés, AIDS.
  • Kapcsolat fertőzött személlyel, mivel a vírusos hepatitis nagyon fertőző.
  • A cirrhotikus májkárosodás tünetei - hepatomegalia, a lép méretének növekedése, vénás mintázat jelent meg a hason stb..
  • A funkcionális májbetegségek klinikai képe - periodikus / állandó fájdalom a jobb hypochondriumban, a bőr sárgulása, hányinger.
  • Az AST és az ALT magas értékei a vér biokémiájában.
  • Terhesség alatt, amikor a májfunkciós tesztek gyengék.
  • Mielőtt antivirális tanfolyamot kezdene a vírusterhelés meghatározása érdekében.
  • A terápia hatékonyságának figyelemmel kísérése.
  • Terápia után a vírusfertőzés megismétlődésének megelőzése.

A PCR-t a hepatitis B megerősített diagnózisával végzik, hogy kizárják a vegyes típusú májkárosodást.

Felkészülés a kutatásra és a mintavételre

Hogyan készülhet fel az elemzésre, az orvos megmondja. A pontos eredmény elérése érdekében a betegnek ajánlott az előkészítés. A következő ajánlásokból áll:

  1. Az elemzést reggel, éhgyomorra kell elvégezni. Vérvétel előtt csak tiszta, szénsavas vizet szabad inni. Utolsó étkezés - 8 órával a gyűjtés előtt.
  2. Ha reggel nem sikerül elvégezni a tesztet, akkor megteheti este vagy ebédidőben is, ami a legfontosabb - 5-6 órával étkezés után, nem korábban.
  3. 48 órával a vizsgálat előtt mondjon le alkoholos italokról, koffeintartalmú italokról és gyümölcslevekről.
  4. 2 napig diétát kell követnie, kizárva az összes káros terméket. Néhány orvos azonban úgy véli, hogy a zsíros, sült ételek nem befolyásolják a PCR-teszt pontosságát..

Ne szedjen gyógyszereket 24 órán át az orvosi manipuláció előtt. Ha ez nem lehetséges, értesítse orvosát. Az elemzést nem ajánlott azonnal elvégezni ultrahang, CT, masszázs és egyéb fizioterápiás eljárások után.

A vérvétel a következőképpen történik:

  • A páciens alkarján meghúzott speciális szorító segítségével az orvos leállítja a vénás véráramlást. A vénák jobban láthatóvá válnak, ami megkönnyíti a tű behelyezését, majd a vért.
  • A steril tű bevezetése előtti bőrfelületet alkoholtartalmú folyadékkal kezeljük.
  • A vénába tűt helyeznek, amely után egy kémcsövet rögzítenek rajta, amelybe a vér áramlik.
  • A tű behelyezése után a sûrût eltávolítjuk. Gyűjtse össze a szükséges mennyiségű vért, távolítsa el a tűt.
  • Az injekció beadásának helyére alkoholba mártott pamut törlőt visznek fel.

Annak elkerülése érdekében, hogy a tű beadási helyén zúzódás képződjön, elég erősen meg kell nyomni a vattapálcát a sérült területig, meg kell hajlítani a karját, és 3-4 percig ebben a helyzetben kell tartani..

Ha a beteg vért hígító gyógyszereket szed (Aspirin, Warfarin), akkor bizonyos problémák adódhatnak a vérzés leállításával.

A PCR előnyei más vizsgálatokkal szemben

A polimeráz láncreakciós módszer bizonyos előnyökkel jár más diagnosztikai technikákkal szemben..

A tanulmány előnyeit a táblázat ismerteti:

Tanulmány típusaLehetséges eredmény és a tervezett átirat
Kiváló minőségű PCR
Mennyiségi
Genotipizálás
A patológia kórokozójának közvetlen diagnózisaMás vizsgálatok lehetővé teszik számunkra, hogy választ adjunk - van-e kórokozó a testben, vagy sem. De PCR technikák alkalmazásával konkrétan meghatározhatja a vírusos ágens típusát.
Tanulmányi sajátosságA PCR egy egyedi DNS-darabot detektál, amely csak egyfajta vírusos ágensnek felel meg. Ez minimalizálja a hibák esélyét..
Nagyfokú érzékenységMég a vírus csekély koncentrációja is kimutatható a vérben.
Az összes kórokozó meghatározásaA kutatás során minden kórokozó kimutatható.
Látens fertőzésekA vírusos kórokozó mellett olyan fertőzések is kimutathatók, amelyek látens lefolyásúak, magas antigén aktivitással különböztethetők meg..

Ha a beteg pozitív eredményt kap, az azt jelenti, hogy a hepatitis kórokozójának genetikai anyagát megtalálták a biológiai folyadékban. Negatív összesen - a vírusnak nincs nyoma.

Az eredmények dekódolása

Az orvosnak meg kell fejtenie az eredményeket azon következtetés alapján, amelyet a beteg a laboratóriumban kap. Szükséges az adatok elemzése a biokémia, a CBC, az ultrahang mutatóival együtt.

Minőségi

Egy kvalitatív vizsgálat megmutatja, hogy az emberi vérben milyen vírusos kórokozó van vagy nem. Kétféle lehet - negatív (norm) vagy pozitív eredmény.

Az űrlap néha azt mondja: megtalált vagy nem található.

Pozitív eredmény - a laboratóriumi asszisztens azonosította a páciens vérében a vírus kórokozójának genetikai anyagát, a fertőzés beigazolódott. Negatív következtetés - nincs fertőzés, a vírus RNS-fragmensei az érzékenységi határok alatt vannak.

Mennyiségi

A kvantitatív elemzés az eredmények több lehetőségét is felveti. A kényelem érdekében táblázat formájában mutatjuk be őket..

EredményDekódolás
NegatívEz az egészséges ember szokása. Ez azt jelenti, hogy a vizsgált biológiai anyagban nincs vírusos hepatitis RNS, vagy a tartalma kisebb, mint az érzékenység küszöbértéke.
Legfeljebb 1,8 * 10 ^ 2 NE / mlAzt jelzi, hogy az RNS-tartalom kisebb, mint a kvantifikációs tartomány. Ezt az eredményt körültekintően kell értelmezni, mert ellentmondásos. Ezenkívül más vizsgálatokat is végeznek a későbbi összehasonlítás céljából. Ismételje meg a PCR-tesztet is.
Legfeljebb 8 * 10 ^ 5 NE / mlAlacsony vírusterhelés. Ez az eredmény általában azt jelenti, hogy a kezelés hatékony..
8 * 10 ^ 5 NE / ml-tőlMagas vírusterhelés. A kezelés azonnal szükséges (ha nem hajtják végre), vagy a gyógyszer korrekciója szükséges.
2,4 * 10 ^ 7 NE / mlAz RNS nagyobb, mint a felső kvantifikációs maximum. Egy ilyen eredmény hátterében a vírusterhelést nem ítélik meg. Egy második vizsgálatra van szükség biológiai folyadékminta hígításával.

Genotipizálás

Eredmény - egy specifikus genotípusú ribonukleinsavat találtunk. Ezen felül feltüntetik a genotípust és altípust, a laboratóriumi asszisztens latin betűkkel és számokkal kódolja a következtetést. Például az 1a genotípus. Összesen 7 genotípust, 67 altípust különböztetünk meg.

Eredmény - hepatitis C vírus RNS-t detektáltak - ez egy ritka genotípus DNS-je, amely nem tulajdonítható a gyakori vírusos szereknek, ezért további diagnosztikára van szükség.

Amikor a PCR negatív és az ELISA pozitív

Megdönti a laboratóriumi asszisztens hepatológus vagy fertőző betegség specialistájának következtetését. Mindig fennáll annak a veszélye, hogy hamis negatív vagy hamis pozitív eredményt kap. Néha előfordul, hogy a PCR negatív, az ELISA pedig pozitív.

Ez azt jelenti, hogy jelenleg nincs vírus a beteg vérében, de akut betegségben szenvedett. Általában úgy gondolják, hogy az ELISA olyan antitesteket mutat, amelyeket az immunrendszer termel a kórokozó testbe való behatolása után..

Az ELISA-t a PCR-hez képest alacsony megbízhatóság és megbízhatóság jellemzi, ezért elsődleges szűrésként használják. A vírusos hepatitis diagnosztizálásakor a polimeráz láncreakció elengedhetetlen.

A hepatitis C vizsgálatának költségei

Vizsgálatokat végezhet abban a kórházban, ahol a beteget megfigyelik, ha van ott laboratórium, vagy fizetett alapon elmehet egy magánközpontba.

Rövid idő alatt olyan laboratóriumi központokban érheti el az eredményt, mint a Gemotest, Invitro, Helix.

Kutatási költség a laboratóriumtól függően:

A laboratóriumi szolgálat neveÁrpolitika
Helix· A biológiai anyag mintavételének költsége - 170 rubel.

Minőségi + kvantitatív kutatás PCR módszerrel - 3990 rubel.

Vírusos betegség antitestjeinek kimutatása - 1500 rubel (2-3 nap).

A vírus aktivitásának ellenőrzése a terápia megkezdése előtt - 4090 rubel.

InvitroA hepatitis C vírus RNS mennyiségi kimutatása PCR-rel - 3140 rubel.

Biológiai anyag (vénás vér) gyűjtése - 199 rubel.

Vírusterhelés felmérése valós idejű detektálással - 18 000 rubel.

Kiváló minőségű ultrahangos vizsgálat - 3000 rubeltől.

Genotipizálás - 1250 rubeltől.

HemotestMennyiségi kutatási ár 2200 rubel.

Kiváló minőségű diagnosztika 700 rubeltől.

A kórokozó RNS-ének meghatározása - 4000 rubelből.

Vérminta vénából körülbelül 150 rubel.

A vizsgálat időtartama átlagosan 2-3 nap. Egyes laboratóriumokban sürgős elemzési szolgáltatás működik, költsége 1,5-2-szer magasabb. Arra is van lehetőség, hogy orvosi adót hívjon véradásra, és az eredményeket e-mailben vagy személyesen megkapja, amikor kapcsolatba lép a laboratóriummal.